"Wykorzystanie białek szoku cieplnego w reaktywacji (refoldingu) NTPDaz roślinnych."

Główną przyczyną miażdżycy oraz zawałów i zatorów serca i mózgu jest niedrożność naczyń krwionośnych wywołana niekontrolowaną agregacją płytek. Czynnikiem inicjującym ten proces jest wzrost stężenia nukleotydu adeninowego (ADP) we krwi. Stężenie zewnątrzkomórkowych nukleotydów we krwi utrzymywane jest na stałym poziomie. Ich obecność w świetle naczyń jest konsekwencją uszkodzenia komórek śródbłonka (np. pęknięcia blaszki miażdżycowej), lizy komórek i egzocytozy. W warunkach fizjologicznych nukleotydy w przestrzeni pozakomórkowej są cząsteczkami sygnalizacyjnymi utrzymującymi homeostazę układu sercowo-naczyniowego. Związki te, z udziałem receptorów typu P, wpływają na regulację ciśnienia krwi i proces hemostazy. Stężenie nukleotydów układu krwionośnego regulowane jest przez enzymy zlokalizowane na powierzchni komórek oraz we krwi - głównie ektonukleotydazy z rodziny NTPDaz. Celem prowadzonych badań jest opracowanie optymalnej metody otrzymywania i oczyszczania, a także analiza właściwości katalitycznych rozpuszczalnych NTPDaz roślinnych hydrolizujących ADP i charakteryzujących się wysoką aktywnością właściwą oraz niewielką immunogennością. Uzyskane białko zostanie wykorzystane do przygotowania nowego enzymatycznego leku przeciwzakrzepowego. Lek ten może być stosowany w leczeniu zatorów i zawałów serca oraz mózgu. Białko roślinnej NTPDazy planujemy otrzymywać w prokariotycznych systemach ekspresyjnych. Zbyt wysoki poziom ekspresji tych enzymów w komórkach bakteryjnych prowadzi do ich akumulacji w nieaktywnej formie ciał inkluzyjnych. Wykorzystanie białek szoku cieplnego ma na celu sprawdzenie, czy pozwolą one na otrzymanie aktywnej NTPDazy in vivo lub czy zwiększą wydajność stosowanej metody refoldingu in vitro. Zreaktywnowane białko będzie oczyszczane z udziałem chromatografii jonowymiennej na kolumnie MonoQ, a analiza jego właściwości katalitycznych prowadzona będzie przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej HPLC.